Wykrywanie dengi NS1 z wykorzystaniem ultraczułego testu ELISA z cyklem Thio-NAD

1. Wprowadzenie

Gorączka denga jest ostrą chorobą zakaźną wywoływaną przezWirus dengiprzez ukąszenie zakażonego komara z gatunku Aedes (Ae. aegypti lub Ae. albopictus),z głównymi objawami, takimi jak wysoka gorączka, zawroty głowy, ból głowy, wysypka iSilny bóle (bóle oczu, mięśni, stawów lub kości) itp. Choroba ta jest szeroko rozpowszechniona w klimacie tropikalnym i subtropikalnym. Szacuje się, że każdego roku zakażonych jest od 100 do 400 milionów ludzi, z czego ponad 80% jest zwykle łagodnych i bezobjawowych. Niemniej jednak ciężka gorączka denga może zwiększać ryzyko śmierci, jeśli nie jest odpowiednio leczona. Dlatego wczesna diagnoza tej choroby ma znaczenie dla jej szybkiego leczenia.

Warto zauważyć, że niestrukturalne białko 1 (NS1), wysoce konserwatywna glikoproteina, jest wydzielane głównie podczas infekcjiDengawirus, który jest intensywnie uważany za główny czynnik patogenezyDenga. W związku z tym NSI jest powszechnie stosowany jako biomarker do wczesnego wykrywania tej choroby.

W tym badaniu test immunoenzymatyczny typu sandwich(ELISA) W połączeniu zdinukleotyd nikotynamidoadeninowy (tio-NAD/S-NAD)metoda cykliczna ( zwana dalej ultraczułym testem ELISA ) jest wykorzystywany do wykrywania NSI, a następnie porównywany z NAAT w celu potwierdzenia jego dokładności wykrywania.

2. Zalety i wady tradycyjnych metod wykrywaniaDenga 

W chwili obecnej tOto cztery główne metody wykrywaniadla Denga.


Izolacja wirusa i identyfikacja mają wysoką specyficzność, ale są czasochłonne i trwają co najmniej 5 dni. Ten szybki antygen test jest najszybszą i najbardziej opłacalną spośród innych metod, ale czułość i swoistość są stosunkowo niskie. Test serologiczny oparty na IgM i IgG jest ograniczony przez liczbę dni zakażenia,tentest należy opóźnić do momentu osiągnięcia poziomu przeciwciał wzrasta do wykrywalnego poziomu.

W klinice NAAT jest często stosowany do określeniaDenga przez zabrudzenia o wysokiej wrażliwości i specyficzności. Jednak ta metoda jest kosztowna, pracochłonna i podatna na fałszywe pozytywne nastawienie, które musi być przeprowadzone przez przeszkolony personel.Aby przezwyciężyć wady tych metod, nowa metoda wykrywaniaultraczuły test ELISA wynosi zastosowane w tym badaniu.

3. Przebieg ultraczułego testu ELISA z cyklem tio-NAD

Para przeciwciałjeststosowany do wychwytywania białka NS1 w teście ELISA typu sandwich oraz fosfatazy alkalicznejjestznakowane na przeciwciałie drugorzędowym. Oprócz przeciwciał pochodna androsteronu, dehydrogenaza 3α-hydroksysteroidowa, tio-NAD i NADHsąużywany do budowy systemu cykli enzymów tio-NAD. Podczas reakcji cyklicznej tio-NAD, tio-NADH stale gromadził się w trójkątny sposób liczbowy i mógł być bezpośrednio mierzony przy absorbancji 405 nm.

4. Porównanie ultraczułych testów ELISA i NAAT w wykrywaniu białka dengi NS1

W NAAT 60 okazów jest dengowo-dodatnich, a 25 dengowo-ujemnych. Wartość progu cyklu NAAT (CT) tych próbek z dodatnim wynikiem dengi wahała się od 12,42 do 31,41.W ultraczułym teście ELISA 59 próbek jest odpowiednio dodatnich w stosunku do wyników NAAT, podczas gdy 25 próbek jest całkowicie ujemnych w stosunku do wyników NAAT.

W porównaniu z NAAT, czułość i swoistość ultraczułego testu ELISA wynoszą odpowiednio 98,3% i 100% (Tabela 2). Spośród 60 potwierdzonych przez NAAT próbek pacjentów z dengą, tylko 1 próbka jest ujemna w ultraczułym teście ELISA. Dane NAAT wykazały, że próbka jest przypadkiem zakażenia DENV typu 4 z wartością CT 21,59. Wyniki ultraczułego testu ELISA są prawie idealnie zgodne z wynikami NAAT, z wartością kappa 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).

5. Wnioski

UMetoda ELISA jest łatwa do wykonania i nie wymaga profesjonalnych stażystów do obsługi. TDetekcję można rozpocząć natychmiast po otrzymaniu małej próbki.Nadaje się szczególnie do wczesnego wykrywaniaDengachoroby wKraje o niskich dochodach.

Odniesienie

Chen, Po-Kai i in. "Zaawansowana metoda wykrywania białka dengi NS1 przy użyciu ultraczułego testu ELISA z cyklem Thio-NAD". Wirusy, tom 15,9, 1894. 8 września 2023, doi:10.3390/v15091894

Zalety i cechy produktuBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC  jest ojednym z niewielu przedsiębiorstwChinyktóre mogą produkować Thio-NADz"Bonzyme" Metoda pełnoenzymatyczna (przyjazny dla środowiska;brak szkodliwych pozostałości rozpuszczalników) oraz unikalna siedmiostopniowa technologia oczyszczania "Bonpure". BONTAC łączy badania i rozwój, produkcję i sprzedaż, z własne fabryki i szereg międzynarodowych certyfikatów zapewniających wysoką jakość i stabilne dostawy produktów.

 

Zrzeczenie się

BONTAC nie ponosi odpowiedzialności za jakiekolwiek roszczenia wynikające bezpośrednio lub pośrednio z polegania na informacjach i materiałach zawartych na tej stronie internetowej.