Niezwykłe zalety ultraczułego testu ELISA z cyklem Thio-NAD w określaniu białka dengi NS1

1. Wprowadzenie

Gorączka denga jest ostrą chorobą zakaźną wywoływaną przezWirus dengiprzez ukąszenie zakażonego komara z gatunku Aedes (Ae. aegypti lub Ae. albopictus),z głównymi objawami, takimi jak wysoka gorączka, zawroty głowy, ból głowy, wysypka iSilnybóle (bóle oczu, mięśni, stawów lub kości) itp. Choroba ta jest szeroko rozpowszechniona w klimacie tropikalnym i subtropikalnym. Szacuje się, że każdego roku od 100 do 400 milionów ludzi jest zarażonych, z czego ponad 80% jest zwykle łagodnych i bezobjawowych. Niemniej jednak ciężka gorączka denga może zwiększać ryzyko śmierci, jeśli nie jest odpowiednio leczona. Dlatego wczesna diagnoza tej choroby ma znaczenie dla jej szybkiego leczenia.

Warto zauważyć, że niestrukturalne białko 1 (NS1), wysoce konserwatywna glikoproteina, jest wydzielane głównie podczas infekcjiDengawirus, który jest intensywnie uważany za główny czynnik patogenezyDenga. W związku z tym NSI jest powszechnie stosowany jako biomarker do wczesnego wykrywania tej choroby.

W tym badaniu test immunoenzymatyczny sprzężony z kanapką(ELISA)W połączeniu zdinukleotyd tionikotynamidoadeninowy (tio-NAD/S-NAD)Metoda cykliczna (Zwana dalej ultraczułą ELISA) jest wykorzystywany do wykrywania NSI, a następnie porównywania z NAAT w celu potwierdzenia jego dokładności wykrywania.

2. Zalety i wady tradycyjnych metod wykrywaniaDenga 

W chwili obecnej tOto cztery główne metody wykrywaniadla Denga.


Izolacja i identyfikacja wirusa mają wysoką specyficzność, ale są czasochłonne i trwają co najmniej 5 dni. Szybki test antygenowy jest najszybszy i najbardziej opłacalny spośród innych metod, ale czułość i swoistość są stosunkowo niskie. Test serologiczny oparty na IgM i IgG jest ograniczony liczbą dni zakażenia, ponieważtenTest należy odłożyć do momentu, gdy poziom przeciwciał wzrośnie do wykrywalnego poziomu.

W klinice NAAT jest często stosowany do określeniaDengaprzez zabrudzenia o wysokiej wrażliwości i specyficzności. Jednak ta metoda jest kosztowna, pracochłonna i podatna na fałszywe pozytywne nastawienie, które musi być przeprowadzone przez przeszkolony personel.Aby przezwyciężyć wady tych metod, opracowano nową metodę wykrywaniaultraczuły test ELISA wynosi zastosowane w tym badaniu.

3. Przebieg ultraczułego testu ELISA z cyklem tio-NAD

Para przeciwciałjeststosowany do wychwytywania białka NS1 w teście ELISA typu sandwich oraz fosfatazy alkalicznejjestznakowane na przeciwciałie drugorzędowym. Oprócz przeciwciał pochodna androsteronu, dehydrogenaza 3α-hydroksysteroidowa, tio-NAD i NADHsąsłuży do budowy systemu cykli enzymów tio-NAD. Podczas reakcji cyklicznej tio-NAD, tio-NADH stale gromadził się w kształcie liczby trójkątnej i mógł być bezpośrednio mierzony przy absorbancji 405 nm.

4. Porównanie ultraczułych testów ELISA i NAAT w wykrywaniu białka dengi NS1

W NAAT 60 próbek jest dengologicznie dodatnich, a 25 jest dengą-ujemnych. Wartość progu cyklicznego NAAT (CT) tych próbek z dodatnim wynikiem dengi wahała się od 12,42 do 31,41.W ultraczułym teście ELISA 59 próbek jest odpowiednio dodatnich w stosunku do wyników NAAT, podczas gdy 25 próbek jest całkowicie odpowiednio ujemnych w stosunku do wyników NAAT.

W porównaniu z NAAT, czułość i swoistość ultraczułego testu ELISA wynoszą odpowiednio 98,3% i 100% (Tabela 2). Spośród 60 potwierdzonych przez NAAT próbek pacjentów z dengą, tylko 1 próbka jest ujemna w ultraczułym teście ELISA. Dane NAAT wykazały, że próbka jest przypadkiem zakażenia DENV typu 4 z wartością CT 21,59. Wyniki ultraczułego testu ELISA są prawie idealnie zgodne z wynikami NAAT, z wartością kappa 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).

5. Wnioski

Ultraczuła metoda ELISA jest łatwa do wykonania i nie wymaga profesjonalnych stażystów do obsługi. Detekcję można rozpocząć natychmiast po otrzymaniu małej próbki. Jest szczególnie przydatny do wczesnego wykrywania choroby denga w krajach o niskich dochodach.

Odniesienie

Chen, Po-Kai i in. "Zaawansowana metoda wykrywania białka NS1 dengi przy użyciu ultraczułego testu ELISA z cyklami tio-NAD". Wirusy, tom 15,9, 1894. 8 wrz 2023, doi:10.3390/v15091894

Zalety produktu i cechyBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC (BONTAC) jest ojedno z niewielu przedsiębiorstw wChinyktóre mogą wytwarzać Tio-NADz"Bonzyme"Metoda całoenzymatyczna(przyjazny dla środowiska;brak szkodliwych pozostałości rozpuszczalników) oraz unikalna siedmiostopniowa technologia oczyszczania "Bonpure". BONTAC łączy prace badawczo-rozwojowe, produkcję i sprzedaż, z własne fabryki i szereg międzynarodowych certyfikatów zapewniających wysoką jakość i stabilne dostawy produktów.

Zrzeczenie się

BONTAC nie ponosi odpowiedzialności za jakiekolwiek roszczenia wynikające bezpośrednio lub pośrednio z polegania na informacjach i materiałach zawartych na tej stronie internetowej.